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如何选择离心机类型?离心机使用注意事项及风险预防_yA47c

未知 2023-06-06 888

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实验室离心机应用领域广泛,一般用于医院化验室、科研机构化验室、食品药品检验化验室、食品卫生化验室等各种实验室。今天东南仪诚为大家介绍如何根据实验需求选择离心机、离心管类型,以及离心机操作注意事项和安全风险防范。

一、离心机的分类

按结构类型可分:台式离心机和立式离心机(落地式离心机)

按分离方式可分:过滤离心机和沉降离心机

按速度快慢可分:低速离心机(10000rpm/min)、高速离心机(10000-30000 rpm/min)、超高速离心机(30000rpm/min)

按容量大小可分:微量离心机(微型离心机或迷你离心机)、小容量离心机、大容量离心机和超大容量离心机

按有无冷冻可分:冷冻离心机和常温离心机

另外还按用途的不同进行分类。

二、如何选择离心机的类型

1.当固相物料为结晶产品时,要求分离时结晶的破损程度低

要根据离心机须根据悬浮液(或乳浊液)中固体颗粒的大小和浓度、固体与液体(或两种液体)的密度差、液体粘度、滤渣(或沉渣)的特性来选择。

2.当分离物质颗粒的直径在1微米到50微米之间,可用低速离心机分离

转速大约在4000转/分钟到7000转/分钟,相对离心力约为2000g到9420g, 一般采用台式低速离心机或落地式低速大容量离心机。

3.当分离动植物组织内的病毒等直径约为0.1微米到1微米的物质时,建议采用高速冷冻离心机,转数为 10000转/分钟到20000转/分钟,离心力约为10000g到100000g。

4.当分离各种蛋白质、DNA、RNA等直径约为0.002微米到0.1微米的组分时,则需要用超速离心机,转速在40000转/分钟以上,离心力要求达到100000g到400000g以上。

5.当物料含有苯、甲苯、石油醚、环戊烷;二氯乙烷、四氯化碳、甲醇、乙醇、乙醚、甲乙醚、、丙酮、环已酮、乙二醇-乙醚、乙二醇-丁醚、甲醛、乙醛、吡啶等易燃易爆的物品时,应选择防爆离心机

6.当分离一些有机活性物质如酶等时,需要分离过程中保持恒温时选择冷冻离心机。

三、如何计算离心力

离心分离的沉降效果由相对离心力(RCF: Relative Centrifugal Force)决定。相对离心力定义为离心加速度与重力加速度的比值,按以下计算公式计算得出:(g: 重力加速度,R:离心半径 cm,N: 转速 rpm)

水平转子、角转子、垂直转子的转子离心

四、离心机安装注意事项

1.离心机一般安装在坚固的水平地面或者台面, 避免阳光照射的地方。通过调整4个脚轮旁边的调整螺栓的高低,来调整离心机安装处于水平位置, 注意不要一个脚轮悬空。

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2.离心机散热量比较大,周围不要堆放杂物,离心机离周围物品至少30cm以上。同时,离心机尽量单独放在一个房间,周围绝对不要放有机试剂、易爆品、易燃品。

3.离心机应使用稳定的额定电压,最好单独一个插座,外壳必须有可靠接地线。

五、如何选择离心管

玻璃离心管:不能在高、超速离心机上使用,只适用于低速离心机。

PA管和PP管:化学性能稳定,半透明,能耐高温消毒。

PC管:透明度好,硬度大,能耐高温消毒。但不耐强酸强碱及某些有机溶剂。主要用于5万(转/分)以上离心。

CN管:质地较软,透明,但不耐强酸强碱及某些有机溶剂,不能高压消毒。适合于蔗糖、甘油等密度梯度离心。透明,利于收集。

钢制离心管:强度大,不变形,能抗热,抗冻,抗化学腐蚀,应用广泛,但使用时避免接触强腐蚀性的化学药品。

注意:

(1)塑料管使用有机溶剂必须符合与对应材料的相容性规定,聚丙烯(PP)离心管(瓶)不能与汽油、煤油等接触使用。聚碳酸酯(PC)离心管(瓶)不能与汽油、乙醛、丙酮、乙醇、异丁醇、甲酚等接触使用。聚乙烯(PE)离心管(瓶)不能与硫酸(50%、75%)、苯、汽油、煤油等接触使用。

(2)离心管在高温高压下消毒,离心管要和管帽分开,如果拧合后一起消毒,容易引起离心管的变形而在实验过程中发生危险。

六、离心管安装注意事项

1.使用各种离心机时,必须事先在天平上精密地平衡所有的离心管、离心管盖、挂篮和适配件等。平衡时重量偏差不得超过离心机说明书上所规定的范围。

(1)重量配平,一般精密平衡要求偏差不超过0.1g,常规应用则要求一般不超过1g,重量偏差不得超过离心机说明书上所规定的范围。

(2)密度配平,离心管内填充的材料必须密度相近,否则载荷会不均匀地分布。

(3)转子中尽量避免装载奇数个离心管,当转子只是部分装载时应均匀分布,以便使载荷均匀地分布在转子体上。

(4)当为奇数个离心管时,加载平衡的平衡管内必须采用密度相近的材料填充,例如,从培养基中离心细菌,可以用水平衡。但不可以用水来平衡氯化铯。

2.装载溶液时,要根据离心溶液的性质及体积选用适合的离心管依据离心机的具体操作说明进行。

3.当使用无盖离心管时,液体不能装得过多,以免离心时甩出,造成转子不平衡、生锈或被腐蚀。

4.当使用盖密封离心管要求抽真空时,一般要求必须将液体装满,以防止离心时塑料离心管的上部因真空变形。

七、如何选择离心方法

常用的三种离心方法:差速离心法;速率区带离心法;等密度区带离心法。

1.差速离心法

差速离心法

差速离心法常用于生化样品的粗制品提取利用不同的悬浮粒子在离心力场中沉降系数的差别,在同一离心条件下,不同粒子沉降速度不同,通过不断增加相对离心力,使一个非均匀混合液体分散系统中各种大小、形状不同的粒子分层沉淀。

操作过程中一般是在第一级离心后将上清液与沉淀分开,然后将上清液再在更高转速条件下离心,分离出第二部分沉淀,如此往复逐级加高转速,逐级分离出所需要的物质。差速离心的分辨率不高,沉淀系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开,常用于生化样品的粗制品提取。

2.速率区带离心

速率区带离心

速率区带离心是一种不完全的沉降分离,沉降效果受物质本身物理尺度的影响较大,一般应用在物质大小相异而密度相同的情况, 是指根据待分离的粒子在离心力作用下,在梯度液中沉降速度的不同,离心后具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内,形成几条分开的样品区带,达到彼此分离的目的。

比如要从静脉血中分离出单个核细胞,前一种分离液Ficoll将血液中的所有单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)分为一个层,同时提取。而Percoll分离液将血液中淋巴细胞和单核细胞分为两个梯度层,分别提取。梯度液在离心过程中以及离心完毕后取样时,起着支持介质和稳定剂的作用,避免因机械振动而引起已分层的粒子重悬。

采用速率区带离心法时,需要严格控制离心时间,既要有足够的时间使各种粒子在介质梯度液中形成区带,又要避免任一待分离粒子形成沉淀状态。

3.等密度区带离心法

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如果正常受精率小于30%,则属于受精率偏低,需要检查卵子成熟度、精子活力,下次再行体外受精时,可能要改行ICSI或者卵子激活(ICSI受精完全失败者)。

卵 裂 率

就是胚胎形成率,分裂成胚胎的受精卵数量/所有的受精卵数量就是卵裂率,一般在95%以上,

但并非每个胚胎都可用,得再根据胚胎质量进行分级,就是下面的可用胚胎率和优质胚胎率。

可利用胚胎率和优质胚胎率

顾名思义,可用胚胎率就是有可用价值的胚胎数量/所有胚胎数量,优质胚胎率就是优质胚胎数量/所有胚胎数量。

优质胚胎的评价多采用形态法,也就是看胚胎颜值,长得漂亮、细胞均匀度好、碎片率低的评分高,

与胚胎真实的发育能力成正相关但不完全吻合,

所以,那些长得丑但其实有才能的胚胎得通过囊胚培养来证明自己的实力。

囊胚形成率

优质分裂期胚胎的囊胚形成率可达到50%,但非优质分裂期胚胎的囊胚形成率只有10-20%,

一旦形成囊胚,虽然还会进行分级,但只要达到冷冻标准的胚胎,都是有潜力的,

不要忽视一个4BC或者4BB囊胚,

不信的话,去看看云南系的大理和勐勐就晓得啦。

着床率

是指每个胚胎的着床能力,分裂期胚胎的着床率在35%左右,囊胚的着床率在45-50%左右,就像撒种子,

不是每一颗都有种植的能力。

临床妊娠率

多数指每移植周期妊娠率,做胚胎移植的患者,成功临床妊娠(B超看到孕囊、胚芽)的患者数量/所有接受移植的患者数量,根据移植胚胎的种类(分裂期胚胎、囊胚)和数量(1-3个,上海最多移植2枚胚胎),这个率从35-70%不等。

持 续 妊 娠 率

指除外胚胎丢失(流产、宫外孕等)后继续妊娠的患者数量/所有接受移植的患者数量。

活 产 率

最终活产分娩数量/移植周期数量,也就是孕妇最终能够成功分娩活产新生儿的比例,这个数据最最重要,与移植胚胎的种类和数量也是密切相关。

即使临床妊娠率很高,但如果胚胎丢失率太高,持续妊娠率会下降,最终活产率也会受到影响。

全球范围角度而言,活产率在30-40%。

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一次说了这么多率,好多朋友搞明白了,也肯定也有不少朋友更迷糊了。

没关系,只要了解如下这一点就行了:

我们科普这些数据的意义就想告诉你,

试管是由一环扣一环的率组成的,成功生下一个孩子真的是很不容易的一件事。

做试管一定程度上而言是在撞大运(各种率),但又不完全是碰运气,负责的医生会根据你的药物反应、具体情况去调整方案,尽最大努力去提高如上的这些率,争取能帮助你们尽快地好孕!

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参考资料


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